比對前，應與試劑盒生產廠家進行溝通，充分了解其產品的性能和不同的應用場景，根據自身使用需求選擇相應的試劑盒。

為獲得試劑盒的真實數據，應利用6~12個月的時間，從流通渠道采購相應品種不同時間生產的不同批次，每個批次3~5盒，按保存條件要求進行保存。收集足夠的試劑盒，用于后續比對實驗。

從流通環節采購試劑盒，比讓生產廠家直接提供，更能夠實現比對實驗的目的。

要求經驗豐富、技術水平較高的長期（一年以上）從事熒光PCR檢測工作的技術人員2~3人。

可以選用?

1）病毒基因組標準物質；?

2）質粒標準物質（含ASFV P72基因全長）；

3）假病毒標準物質；

4）滅活的多類型的臨床樣品。

病毒基因組和質粒標準物質非常純凈，不含雜質，不能形成基質效應，難以評價試劑盒的耐受性和適應性，可以用于試劑盒最低檢出限的比對，驗證試劑盒中引物探針的設計和酶反應體系的擴增效率。

假病毒和滅活的臨床樣品含有不同類型和濃度的雜質，存在基質效應，可以用于試劑盒的敏感性比對和最低檢出限比對。也可使用某些廠家的陽性對照質粒進行試劑盒最低檢出限的比對，但是必須確認該質粒P72基因為全長。

因比對實驗反應數量較多，盡量選用96、48或32孔熒光PCR儀；實驗室所在地有大功率用電設備，應單獨為PCR儀加裝穩壓器。

對人員、PCR儀、移液器、耗材及實驗室環境和操作規程，進行全面驗證。

尤其是熒光PCR儀，選用任意一種廠家同一批次的試劑盒，用同一個中陽性樣品（Ct值30~35左右），一次性進行96、48或32全孔反應，確保每個加熱槽的加熱、降溫、擴增、信號采集性能基本一致。

有條件的實驗室可選用熒光PCR校準試劑盒對PCR儀進行驗證。一旦出現異常情況應進行排查，確保后續的比對實驗完全可控。